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液相色谱有哪些种类? 液相色谱柱保养与维护

在色谱技能发展的进程中.为了区别各种办法,依据固定相的方式发作了各自的命名,如纸色谱、薄层色谱和柱液相色谱。

液相色谱按其别离机理,可分为四品种型。

吸附色谱法吸附色谱法的固定相为吸附剂,色谱的别离进程是在吸附剂外表进行的,不进入固定相的内部。

与气相色谱不同,活动相分子也与吸附剂外表发作吸附效果。

在吸附剂外表,样品分子与活动相分子进行吸附竞赛,因而活动相的挑选对别离效果有很大的影响,一般可选用梯度淋洗法来进步色谱别离功率。

在聚合物的剖析中,吸附色谱一般用来别离添加剂,如偶氮染料、抗氧化剂、外表活性剂等,也可用于石油烃类的组成剖析。

分配色谱法这种色谱的活动相和固定相都是液体,样品分子在两个液相之间很快抵达平衡分配,运用各组分在两相中分配系数的差异进行别离,类似于萃取进程。

一般常用的固定液有 , '-氧二bing腈、聚乙二醇、三甲撑乙二醇和角鲨烷。

选用与气相色谱相同的办法,将固定液涂渍在多孔的载体外表,但在运用中固定液易丢失。

现在,运用较多的是键合固定相。

在这种固体相中,固定液不是涂在载体外表,而是经过化学反响在纯硅胶颗粒外表键合上某种有机基团。

例如,运用氯代十八烷基硅烷与硅胶外表的羟基之间的反响就能够构成一烷基化外表。

这种固定液的长处是不易被活动相剥蚀。

在分配色谱法中,活动相可为纯溶剂,也能够选用混合溶剂进行梯度淋洗,其极性应与固定液不同大一些,以避免两者之间相溶。

一般可分为正相分配和反相分配,如图1所示。

分配色谱的分配类型离子交流色谱离子交流色谱一般用离子交流树脂作为固定相。

一般是样品离子与固定相离子进行可逆交流,因为各组别离子的交流才能不同,然后抵达色谱的别离。

离子交流色谱法是新发展起来的一项现代剖析技能,已广泛用于氨基酸、蛋白质的剖析,也适合于某些无机离子的别离和剖析,具有十分重要的效果。

凝胶色谱法现在,凝胶色谱法既适用于水溶液的系统,又适用于有机溶剂的系统。

当所用的洗脱剂为水溶液时,称为凝胶过滤色谱,其在生物界的运用比较多;选用有机溶剂为洗脱剂时,称为凝胶浸透色谱,在高分子范畴运用较多。

上述的四种不同类型的液相色谱.能够依据样品性质的不同,挑选不同的办法。

每天用满足的时刻来保护色谱柱,您将节约更多用于处理色谱柱毛病的时刻,一起您的色谱柱的寿数也会变得更长!色谱柱的运用寿数,除了与所剖析的样品和活动相及运用频率有关外,zui首要的是与日常的保护密切相关。

色谱柱的运用寿数首要是依据柱效和柱压两个目标来衡量,假如一支色谱柱柱效太低或柱压太高,一般被以为该色谱 柱的运用寿数现已完毕。

因而,延伸色谱柱运用寿数的关 键是,消除引起柱效下降和柱压升高的要素。

一、活动相的pH值

因为硅胶基质的填猜中存在Si-C和Si-O键,活动相超越其pH规模将会导致硅胶基质溶解和键合相碳链断裂,使柱效下降,寿数变短。

因为活动相的pH操控不妥而对色谱柱形成的危害,一般很难使色谱柱康复,因而有必要认真对待,严格操控活动相的pH值。

二、去除样品和活动相中的固体颗粒

样品和活动相中含有的固体颗粒物质会阻塞色谱柱筛板,筛板被堵不只会引起柱压升高,并且也会引起柱效下降,因为筛板的阻塞会引起液流不均,导致色谱峰形拖尾、变宽,乃至呈现双峰,然后使柱效下降。

因而,主张运用超纯水和色谱纯试剂,在剖析前对样品进行超声、针筒过滤,活动相过0.45 m 滤膜,尤其是活动相加入了缓冲盐,有必要过滤。

三、运用保护柱或在线过滤器

样品和活动相经过滤后并不能彻底消除固体颗粒物质,因为泵的磨损、密封圈和管路的老化也会发作固体颗粒物,这些固体颗粒被活动相带入色谱柱,阻塞筛板,导致柱压升高、柱效下降。

保护柱和在线过滤器上都有筛板,其孔径与色谱柱筛板孔径相同,因而能够阻挠固体颗粒物质抵达色谱柱,有用避免色谱柱筛板的阻塞。

因为柱压升高在剖析毛病中占很大份额,因而,除对样品和活动相进行过滤外,主张您在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器。

四、正确运用缓冲盐

缓冲液能够供给离子平衡的反离子,并使活动相坚持必定的离子强度和p H 值,削减拖尾。

缓冲盐一般易溶于水,难溶于有机溶剂,因而缓冲盐运用不妥会致其分出,阻塞填料基质上的微孔和颗粒间的空地,使填料板结,柱压上升;一起阻止了基质上键合的碳链自在舒展,使色谱柱的保存才能下降,柱效下降。

缓冲盐分出后,去除十分困难,因而,正确的运用缓冲盐对延伸色谱柱运用寿数十分重要。正确运用缓冲盐的意图是避免缓冲盐分出,因而正确运用缓冲盐的办法可归结为一句话:运用前要过渡,运用后要冲刷。

具体办法如下:

1.等度条件:运用缓冲盐前用过渡活动相以1.0mL/min 流速冲刷20-30倍柱体积,然后再运用含有缓冲盐的活动相;运用后去除缓冲盐的办法是用过度活动相以1.0mL/min流速冲刷30倍柱体积,然后以纯有机溶液冲刷30倍柱体积保存。

2.梯度条件:用含有缓冲盐的活动相进行梯度洗脱之前,用与初始活动相组成相同的过渡活动相以1.0mL/min流速冲刷30倍柱体积,再开端梯度的运转;剖析完成后,再用过渡活动相以1.0mL/min冲刷色谱柱30倍柱体积,然后以纯有机溶液冲刷30倍柱体积保存。

五、别的,在运用缓冲液的进程中还要留意以下几点:

1.避免运用盐酸盐,盐酸盐对钢质有腐蚀效果;

2.缓冲液zui好要现配现用,往往缓冲液是杰出的菌类培养液,隔天或放置长时刻试验时会发作许多怪现象;

3.运用缓冲液要及时把握pH规模,做到匠意于心;

4.清洗液路和柱子时,有温控可加热到30摄氏度易于冲刷;

5.长时刻用缓冲溶液要留意调查接头处有无分出,若有白色盐类分出,定时用10%硝酸冲刷液路能够避免液路的阻塞;

6.挑选缓冲液要用牢靠的试剂,避免不纯的盐类形成不必要的费事;

过渡活动相是指有机相和水相的组成与剖析活动相相同,可是不含缓冲盐的溶液。

六、避免强保存物质在色谱柱中存留

强保存物质和大分子化合物在色谱柱中累积,对样品中的化合物发作额定的保存行为,不只引起峰形变宽、拖尾,使柱效下降,一起也会引起保存时刻的改变,累积到必定程度时还会导致柱压升高。

因为强保存物质和大分子化合物对色谱别离的影响是一个累积效应,需求必定的时刻才会表现出来,但对许多样品特别是杂乱样品而言,很难判别其是否含有强保存物质,因而要避免强保存物质的累积,需求在每天的日常保护顶用纯甲醇或乙腈30倍柱体积清洗色谱柱。

七、色谱柱的再生

1.反相柱

以下列溶剂次序冲刷30倍柱体积

乙腈-水 四氢呋喃 乙腈-水

2.正相柱

以下列溶剂次序冲刷30倍柱体积正己烷 二氯甲烷 异丙醇 二氯甲烷 活动相

3.硅胶柱除水

30mL 2.5% 2,2 二甲氧基丙烷和2.5%冰醋酸正己烷溶液冲刷柱子